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条件性恐惧标准实验流程 

【摘要】 目的 明确延长创伤后刨伤环境的暴露时间对单一线索条件性恐惧表达的影响。方法灯光线索条件性恐惧训练后延长动物在训练环境中的停留时间。结果 创伤后延长环境暴露时间能够消除动物对环境的恐惧，使之不能自发恢复．并因此抑制了对单一线索的条件性恐惧反应，主要表现为在创伤环境中，延长暴露组动物对灯光线索的条件性恐惧反应低于非延长暴露组[恐惧水平分别为(19．531±6．073)％，(46．094±10．427)％]，达到边缘显著水平(P=0．085)，且这种恐惧下调可以持续至少35d[延长暴露组与非延长暴露组的恐惧水平分别为(21．094土4．897)％，(74．219±9．481)％，尸<0．01]。

【结论】
延长创伤环境暴露时间改变了对创伤环境的“恐惧”表征，从而使创伤环境作为“安全场景设置者”降低了对单一线索条件性恐惧的表达，提示在创伤后延长创伤环境的停留时间，使受害者对环境的恐惧消失，可能有助于预防创伤后应激障碍的形成。

【关键词】 环境暴露； 环境条件性恐惧； 单一线索条件性恐惧； 场景设置； 创伤后应激障碍

【一、材料】
1．动物：雄性SD大鼠16只，初始平均体质量(280±10)g。动物在50．0cm×22．5cm×30．0em的不锈钢笼中群居饲养，每笼4只，自由进水进食。光周期为7：00—19：00，饲养环境温度22～24℃，相对湿度40％一60％。正式实验开始之前，先进行适应性饲养l周，适应期内每天对大鼠进行抚摸使其适应主试人员的操作。本实验所有程序均得到了中国科学院心理研究所伦理委员会认可。
2．设备：实验设备为2个不同的箱子。斯金纳操作性条件性反射箱(30cm×21cm×30cm长方体箱子，美国Med公司生产)用来条件性恐惧的训练与创伤环境恐惧记忆测试，其前后壁由透明有机玻璃构成，左右为铝质侧壁，条件性线索信号由右侧侧壁上部两个刺激灯发出。底板由18根不锈钢条构成，每根不锈钢条直径0．6cm，中心间隔1．5cm，可通由计算机控制的电流。斯金纳箱被放在一个隔音的外箱内，外箱侧壁的风扇发出约65dB的噪音，一个红色的25w灯泡作为环境照明。自发运动测试箱为一个35cm×35cm×50cm黑色有机玻璃长方体箱子，一面侧壁装有刺激灯以提供条件性线索，背景照明由15w的黄色灯泡提供，此箱为条件性恐惧记忆测试提供非创伤环境。实验过程中，斯金纳箱用75％的酒精清洁，自发运动箱用洗涤剂清洁，以使两个环境截然不同。
【二、方法】
1．条件性恐惧训练与环境暴露：1周适应期结束后第1天，将大鼠放入斯金纳箱与自发运动测试箱各5min进行适应。第2天进行条件性恐惧训练，训练时将大鼠放人斯金纳箱，先给予3rain适应，3rain结束后给予15次灯光(持续8S，CS)-电击(0．8mA，持续1S，us)的匹配训练，灯光与电击同时结束，每次匹配呈现的间隔为60S。最后1次匹配呈现后根据大鼠被取出的时间将大鼠分为2组，一组在最后一次匹配呈现后2min取出(非延长暴露组)，一组在90rain(延长暴露组)后取出。
2．条件性恐惧记忆测试(测试一)：条件性恐惧训练后第2天进行恐惧记忆测试，测试环境分别为创伤环境(斯金纳箱)与非创伤环境(自发运动测试箱)，先进行非创伤环境测试。测试时先进行3rain环境暴露，3rain结束后给予2次灯光。不伴随电击，每次灯光持续8S，2次间隔60S，最后一次灯光结束后2rain取出大鼠。非创伤环境测试后进行创伤环境测试。由于2组大鼠先前训练后环境暴露的时间不同，因此会对环境有不同的恐惧反应，为了消退这种恐惧反应，先让2组大鼠暴露于创伤环境60min。60rain环境暴露分3个时间段进行，每段20rain，间2rain。最后一个20rain暴露结束后2rain，正式进行条件性恐惧测试，测试程序与非创伤环境测试相同。
3．条件性恐惧记忆自发恢复测试(测试二)：测试一后35d，再次测试动物在创伤训练环境与非创伤环境中的恐惧反应。2组动物在两个环境中的测试顺序分别进行了平衡，一半先在创伤环境中测，一般先在非创伤环境中测，测试程序与上同。整个行为程序过程中大鼠的行为被录像保存。动物的恐惧行为由秒表记录，表现为除了维持生命的呼吸之外没有任何的动作，即所谓的“僵直”行为(freez．ing behavior)。本研究所有图中的纵坐标均为动物
“僵直”行为的时间占全部测试时间段的百分比，即动物的恐惧水平。

4．数据统计：条件性恐惧训练采用单因素重复测量方差分析方法进行统计分析，环境与灯光线索条件性恐惧采用t检验与2×2双因素方差分析方法进行统计分析，其中环境条件性恐惧测试的两个因素分别为组内因素测试(测试1，测试2)与组别间因素(延长暴露组，非延长暴露组)，灯光线索条件性恐惧测试中的两个因素为组内因素环境(创伤环境，非创伤环境)与组别间因素(延长暴露组，非延长暴露组)。所有数据均由SPSS12．0 forwindows统计软件包完成。

【结 果】
一、创伤后立即进行创伤环境暴露对环境条件性恐惧记忆表达的影响非延长暴露组与延长暴露组的不同之处在于条件性恐惧训练后在原训练环境中停留的时间不同，延长环境的暴露时间显著降低了动物对原创伤环境的恐惧反应(数据未呈现)。环境条件性恐惧为刨伤环境中测试一前60rain暴露中的前3rain(获得)与最后3rain(消退后)的恐惧水平，以及两次测试前灯光线索出现前3min的恐惧水平。从图la可以看出，2组动物对环境的条件性恐惧的获得水平相同。训练后第2天的l h创伤环境暴露之后，2组动物对环境的恐惧反应基本都消失(即消退后水平)，随后的测试一也表明2组之间的环境恐惧水平相同。但在环境条件性恐惧自发恢复测试中(图lb)，方差分析结果显示，测试主效应显著(F(1．葛)=9．(136，P<o．01)。组间主效应显著(■旧)=6．709，P<0．05)，测试与组间交互效应边缘显著(F，．盈，=3．359，P--0．oTs)。简单效应分析表明，菲延长暴露组在两次测试中恐惧水平差异有非常显著性(F㈦嚣，=9．76，P<0．01)。而延长暴露组在2次测试中环境条件性恐惧差异无显著性(P>0.05)。